小鼠小脑组织细胞的培养方法

　　细胞简介：

　　细胞名称：小鼠小脑组织细胞C8-D1A/(STR鉴定正确)

　　智立编码：2021125995990779

　　别称C8D1A;AstrocytetypeIclone

　　种属小鼠

　　年龄（性别）8日龄

　　组织来源脑组织

　　生长特性贴壁细胞

　　细胞形态神经细胞样

　　生物安全等级1

　　生长培养基DMEM＋10%FBS＋1%P/S

　　推荐传代比例1:3-1:4

　　推荐换液频率2~3次/周

　　冻存条件

　　冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO

　　温度：液氮

　　培养条件

　　气相：空气，95%；CO2，5%

　　温度：37℃

　　保藏机构ATCC;CRL-2541

　　细胞的培养：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

　　3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。