产芽孢梭菌的使用说明

      中文名：产芽孢梭菌（生孢梭菌）

　　拉丁属名：Clostridiumsporogenes

　　规格：冻干粉

　　用途：无菌检查、微生物限度检查用菌株

　　保存条件：常温

　　批号：64941-2A6-1

　　生物安全等级：1

　　性状：乳白或白色、冻干粉

　　包装：菌种管

　　产芽孢梭菌的菌种培养

　　1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

　　2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

　　3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

　　4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

　　5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

　　6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

　　三、产芽孢梭菌的使用方法和要求

　　1.培养基：胰酶消化碎肉半流体培养基（培养基121）或适宜培养基。

　　2.培养条件：35~37℃，厌氧。

　　3.启开方法:

　　1)复苏菌种前应准备各适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备，所有操作均应在合适的生物安全防护条件下进行；

　　2)启开菌种宜采用据开法（据开前用75%酒精棉消毒菌种管外壁）。用吸管将液体培养基0.5ml左右注入被启开的菌种安瓿中并吹打，使安瓿中冻干菌种溶解成菌悬液；

　　3)将上述菌悬液全部吸出，分别接种到固体斜面和液体培养基中，于35~37℃厌氧条件下培养18~24小时；

　　4)次日观察菌种的生长情况，如菌种未生长，应继续培养至72小时；

　　5)复苏后的菌种按规定使用。

　　四、储藏条件：暂不启开的安瓿可置于2~8℃保藏。

　　五、注意事项

　　1.该菌种用于实验室检验及研究用，不能用于商业用途。

　　2.初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，单位不负责任。