人主动脉平滑肌细胞的培养方法

一.细胞简介：

　　产品名称：人主动脉平滑肌细胞/HASMC细胞

　　智立编码：20222179133725068

　　细胞数量：1*10^6

　　组织来源：主动脉

　　细胞种属：人源

　　生长特性：贴壁

　　培养基：rhFGF-basic0.5mL5ng/mLrhInsulin0.5mL5μg/mLAscorbicacid0.5mL50μg/mLL-glutamine25.0mL10mMrhEGF0.5mL5ng/mLFetalBovineSerum25.0mL5%

　　形态特征：形态变长，有时呈三角形

　　培养条件：胎牛血清至终浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37℃

　　细胞描述：一种在低血清条件下繁殖血管平滑肌细胞的完整解决方案。

　　细胞冻存：液氮冻存（冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO）

　　细胞运输：干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）

二.细胞培养方法：

　　1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

　　①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

　　②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

　　③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

　　④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

　　⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

　　⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

　　2、细胞复苏：

　　①将冻存管在37℃温水中摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

　　②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

　　3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

　　①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

　　②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

　　③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

　　④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

　　三.注意事项

　　冻存细胞接收后的处理：

　　1.干冰运输，收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏；

　　2.收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

　　复苏细胞接收后的处理：

　　1.收到细胞后，请检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。

　　2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。

　　3.建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。

　　4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。